不同样品对黄羽种鸡禽白血病病毒净化检测效果的影响

【目的】评估黄羽种鸡禽白血病的净化工作,比较源于同一鸡群不同样品对禽白血病病毒(ALV)检测结果的影响.【方法】采用ALV抗原ELISA方法对广东一黄羽种鸡场采集的2 691枚种蛋进行检测,根据检测结果采集其中70份不同S/P区间所对应的母鸡抗凝血,分离血浆后分别同时接种于CEF和DF-1细胞,用病毒分离方法进行检测,并用PCR方法进行亚群鉴定.【结果和结论】从送检种蛋蛋清共检出ALV p27阳性样品243份,阳性率为9.03%(243/2 691);蛋清不同ELISA S/P区间所对应的病毒分离情况分别为:蛋清ELISA S/P≥2.0的鸡只其血样CEF和DF-1细胞病毒分离率均为100%;1.5≤S/P2.0的鸡只病毒分离率均为88.9%;1.0≤S/P1.5的鸡只病毒分离率均为85.7%;0.2≤S/P1.0的鸡只病毒分离率分别为60%~75%(CEF)和40%~50%(DF-1);0.1≤S/P0.2的鸡只病毒分离率为62.5%(CEF)和50%(DF-1);S/P0.1的鸡只分别为27.2%(CEF)和9.1%(DF-1)的病毒分离率.PCR结果显示,所有7份CEF+DF-1-的CEF培养物中有6份为内源性ALV-E.研究表明,在蛋清ELISA检测时,S/P越高的阳性蛋清样品其对应母鸡越可能是外源性ALV病毒血症阳性;有一定比例S/P较低的阳性蛋清样品是由对应母鸡体内的内源性ALV排毒所致;而净化初期少数蛋清S/P为阴性的蛋清,其对应母鸡仍可能检出外源性ALV,说明在黄羽种鸡外源性ALV净化方案中单独使用1次蛋清ELISA检测可能会给禽白血病的净化检测造成一定的"误诊"和"漏检".     

环洞庭湖区活禽批发市场和水禽场H6亚型禽流感监测

为了解环洞庭湖区活禽批发市场和水禽场H6亚型禽流感病毒的分布和流行情况,分别于2009—2011年对环洞庭湖地区活禽批发市场、2011—2013年对水禽场的H6亚型禽流感进行了系统监测。对在活禽批发市场上采集的拭子样品先由尿囊腔接种SPF鸡胚,然后用血凝试验(HA)测定所收集的尿囊液,对HA测定有滴度的再进行血凝抑制试验(HI),并与RT–PCT方法相结合鉴定病毒的亚型。检测结果显示:在环洞庭湖区的5个活禽批发市场上都分离到H6亚型禽流感,并且在鸡、鸭、鹅拭子中都分离到该病毒,总的分离率为6.49%;水禽场H6亚型禽流感病毒群体阳性率达3.6%,拭子的H6亚型病毒分离率为0.29%,活禽批发市场鸭拭子H6亚型禽流感病毒分离率为9.58%,表明市场环节水禽H6亚型禽流感的隐性带毒率比养殖环节高,在一定程度上说明禽流感在活禽批发市场存在水平传播的风险。     

鹅源H5N1亚型禽流感病毒株HA基因的克隆与序列分析

本研究对1株鹅源H5N1亚型禽流感病毒血凝素（HA）基因进行了扩增、克隆及序列测定。结果表明：所扩增的片段长1707bp，包含完整的开放阅读框架，编码568个氨基酸。该毒株裂解位点的氨基酸序列为RRRKKR，具有高致病性的分子特征；该毒株有6个潜在糖基化位点；受体结合位点的氨基酸分别为YWIHELY，其左侧壁氨基酸为SGVSSA，右侧壁为NGQSGR。该毒株与国内外一些参考毒株的HA基因序列比较，核苷酸同源率为76.8％～98．1％，氨基酸同源率为85．7％～97．4％，属于欧亚种系。     

鸡传染性支气管炎病毒肾型毒株血凝特性的研究

本文对鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）澳大利亚Ｔ株和分离的四株肾型毒株（ＢＪ＿（９３０１）、ＢＪ＿（９３０２）、ＴＪ＿（９３０１）、ＨＮ＿（９３０１）株）的血凝特性进行了系统研究。结果表明ＩＢＶ供试毒株经１～２％胰蛋白酶处理后，能凝集鸡和小鼠红细胞，同一毒株对两种红细胞的凝集价相近，且均能被ＩＢＶ澳大利亚Ｔ株血清所抑制。处理后的ＩＢＶ对鸡红细胞的血凝以缓冲液浓度０．０１～０．０５ＭｐＨ６．０～８．４为宜，对反应温度及稀释液种类无严格要求。ＩＢＶ的血凝活性能耐受３７℃２３天、５６℃１２小时、８０℃１．５小时，但在－３０℃、４℃和室温下保存２个月后，绝大部分丧失血凝活性。ＩＢＶ经０．２％甲醛、０．２％脱氧胆酸钠、２％硼氢化钠、０．０１Ｍ高碘酸钠３７℃灭活２４小时，仍能保持其血凝活性。从ＩＢＶ的血凝活性可被过量胰蛋白酶破坏和氯仿灭活，推断该血凝素可能是由脂质和蛋白质组成。     

禽肺病毒病

从病原学、流行病学、临床症状、病理变化方面对禽肺病毒病进行了详尽的分析和和论述，并提出了诊断和防治应注意的问题。     

采用SP法检测商品蛋鸡感染J亚群禽白血病病毒对产蛋性能的影响

本研究属世界上首次报道J亚群禽白血病病毒感染对蛋鸡产蛋性能的影响。尸体剖检观察到产蛋鸡的生殖系统发育不良，表现为卵巢、输卵管幼稚型，输卵管粗细不均。组织病理学观察，发现卵巢组织中有大量的胞浆内充满球形嗜酸性颗粒的骨髓瘤细胞。用特异性抗J亚群禽白血病病毒(ALV—J)囊膜糖蛋白gp85的单克隆抗体检测不产蛋鸡的卵巢、输卵管等待检的组织切片，均检出病毒阳性抗原。结果表明ALV—J的感染造成产蛋鸡卵巢、输卵管发育不良，是蛋鸡不产蛋的直接原因。     

实验性鸡大肠杆菌病病理学动态变化

用致病性大肠杆菌O18分离株和／或低致病性禽流感病毒（Mildly pathogenic avian influenza virus ,MPAIV)接种10－12日龄SPF鸡。在接种后1－96h进行临床症状与大体病理变化、组织学观察发现：大肠杆菌接种组、MPAIV接种组和健康接种组除扑杀鸡外未见鸡死亡，MPAIV与大肠杆菌混合接种组除扑杀鸡外死亡率为24％。混合接种组的病变比大肠杆菌接种组出现的时间早，恢复也慢，各脏器的病理变化更严重。MPAIV主要引起各实质器官的坏死，结果表明，大肠杆菌经气管内接种后试验鸡主要表现为呼吸道的炎症反应；MPAVI可使鸡大肠杆菌病严重化。     

细胞外高钙对鸡肾小管上皮细胞活力和NO产生的影响

为探讨一氧化氮（NO）在高钙致鸡痛风中的作用，利用已建立的鸡原代肾小管上皮细胞的体外研究模型，经不同浓度的钙进行处理．通过MTT比色法观察了高钙对细胞活性的影响；采用硝酸还原酶法测定了不同浓度高钙处理原代肾小管上皮细胞后培养上清液中亚硝酸根／硝酸根（NO2^-／NO3^0）的含量（NO的静态氧化形式）。结果表明，分别用4．0mmol／L（试验组Ⅰ），8．0mmol／L（试验组Ⅱ），12．0mmol／L（试验组Ⅲ），16．0mmol／L（试验组Ⅳ）Ca^2＋处理细胞，各时段组的细胞活性与对照组相比均显著降低（P〈0．01），且细胞外钙浓度越高，细胞活性降低越明显。高钙处理细胞24h后．各组培养液中NO的含量较对照组升高不显著；48h后，试验Ⅳ组的NO比对照组显著升高；72h后，各试验组与对照组相比NO的含量均显著升高。这些结果说明，细胞外高钙能够直接损害肾小管上皮细胞，而NO可能在肾小管上皮细胞的损害中起一定的作用。     

感染性犬2型腺病毒全基因组克隆及鉴定

以犬 2型腺病毒 (canine adenovirus type- 2 ,CAV- 2 )自然弱毒株 YCA18基因组 DNA为模板 ,经 PCR扩增分别获得其双链两末端 10 13bp(U)和 972 bp(D)的 DNA序列 ,以首尾相接方式克隆入载体 p Poly2 ,获得重组质粒p Poly2 - UD。以 Hind 和 Bst B 双酶切 p Poly2 - UD,回收含载体和部分 U、D的大片段并与 CAV- 2 DNA共转化感受态 E.coli Sure TM,经菌体内同源重组 ,获得含有 CAV- 2全基因组序列的重组质粒 p Poly2 - CAV- 2。后者以 Cla 和 Asc 双酶切 ,释放 CAV- 2全基因组 ,通过脂质体介导转染 MDCK细胞 ,盲传 3代后重复转染 1次 ,4d后 ,出现腺病毒典型病变。细胞上清血凝效价为 1∶ 6 40 ,并可被 CAV- 2抗血清有效抑制。以上结果表明 ,本研究获得了具有感染性的CAV- 2全基因组重组质粒 ,为以 CAV- 2作为重组疫苗载体的系列研究奠定了重要基础。     

Effects of forest patch size on avian diversity

The effects of landscape patchiness on the diversity of birds of the Georgia Piedmont were investigated during 1993. Birds were sampled along line transects within relatively large (10–13.25 ha) and small (less than 3.25 ha) forest patches located within nonforest agricultural landscapes. Patterns of habitat use in these patches were compared to those in contiguous forest patches larger than 13.25 ha. Analysis of variance revealed significant differences in diversity between large and small woodlots and between contiguous and fragmented landscapes, especially in terms of the numbers of edge and interior species and winter-resident, summer-resident, and year-round birds observed.